InVivoKines™ - 用於體內研究的活性和穩定性增強的蛋白質
細胞激素是促進免疫細胞之間通訊、協調對感染和腫瘤的反應以及整體免疫穩態的小蛋白質，這使得它們對各種免疫相關疾病的臨床前和臨床研究具有吸引力。它們在免疫中發揮關鍵作用，而基於細胞因子的工程療法代表了免疫療法的新發展。然而，細胞因子的廣泛使用受到其血液半衰期短、多效性和不利的生物分佈的限制。增加對細胞激素生物學和創新細胞因子工程和技術的了解可以應對這些限制，但通常無法用於基礎研究目的。
InVivoKines™ 是AdipoGen Life Sciences 內部開發的新一代重組融合蛋白，用於免疫療法、臨床前和轉化體內研究。 InVivoKines™ 是採用 Knobs-into-Holes (KIH) 技術的基於 Fc 的融合蛋白。
InVivoKines™ 品質特點
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天然構型 − 於 HEK 293 或 CHO 細胞中生產
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無動物成分的生產條件
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經 ELISA / 細胞基礎試驗確認具有高生物活性
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經由體積排阻層析（SEC）驗證純度與均質性
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低內毒素含量
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批次間一致性穩定
更多技術細節
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KIH 技術（Knobs-into-Holes）
一種工程化抗體的技術，可精確誘導重鏈異源二聚體的形成，用於構建雙特異性抗體或融合蛋白。 -
靜默 Fc-KIH 結構域（含 LALA-PG 突變）
利用 LALA-PG 突變抑制 Fc 區的效應功能（如 ADCC/CDC），以降低免疫相關副作用，並提升治療專一性與安全性。 -
高效單體型 IL-2 蛋白
工程化的單體 IL-2 分子，保有活性但具有更好的藥理特性（如減少毒性、改善分布等）。 -
全新高活性的異源雙體 IL-27-KIH 蛋白
使用 KIH 技術構建的 IL-27 融合蛋白，具有優異的活性與穩定性，為創新型免疫調節劑。 -
全新獨特的同源雙體活性 GDF15-KIH 蛋白
首創同源雙體形式的 GDF15 蛋白，展現高生物活性與新穎作用機制，潛力可應用於代謝或腫瘤疾病。 -
InVivoKines™ − 產品總覽
InVivoKines™ 為一系列經 KIH 技術設計、具備高穩定性與特異性的蛋白質產品組合，適用於臨床前與研究用途。
天然細胞激素融合 Fc 結構域（採用 KIH 技術）
InVivoKines™ − 基於 Fc 的融合蛋白平台，採用 Knobs-into-Holes（KIH）技術
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Fc-KIH 技術可實現 Fc 區的異源二聚體化（heterodimerization），從而構建具有雙臂結構的蛋白質，靈活設計天然存在的單體型、異源雙體或同源雙體活性蛋白。
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Fc-KIH 結構域顯著延長細胞激素在血漿中的半衰期，從而大幅提升其藥物動力學（PK）表現，同時保持其生物活性。
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Fc-KIH 結構能與 Fcγ 受體（FcγRs）與補體蛋白 C1q 結合，可能誘導 *ADCC（抗體依賴性細胞毒殺）、ADCP（抗體依賴性細胞吞噬）與 CDC（補體依賴性細胞毒殺） 效應。
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若於 Fc-KIH 結構域中引入 LALA-PG 突變，則可有效 抑制其與 FcγRs 及 C1q 的結合，而 不影響與 FcRn 的結合能力與 Fc 穩定性。
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所有 Fc-KIH 蛋白皆由哺乳動物細胞生產，具有 低內毒素含量，品質穩定可靠。
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這些 Fc-KIH 蛋白設計用於體內（in vivo）研究，同時亦適用於體外（in vitro）實驗！
AdipoGen Life Sciences 採用 KIH 技術平台，成功開發出多種 單體型、異源雙體與同源雙體的 Fc 融合蛋白，為細胞激素研究與藥物開發提供創新工具。
*Antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC), Antibody-dependent cellular phagocytosis (ADCP), Complement-dependent cytotoxicity (CDC)
Knobs-into-Holes（KIH）技術背景介紹：
Knobs-into-Holes（KIH）技術為一種開創性的抗體工程設計架構，由 Ridgway 等人於 1996 年首次提出，其核心概念在於實現抗體重鏈的異源二聚體化，從而產生具有「兩個不同抗原結合臂」的 IgG 分子。此技術傳統上主要應用於**雙特異性抗體（Bispecific Antibodies）**的構建，對於藥物開發具有重要意義。
KIH 技術透過改變 Fc 區 CH3 結構域中參與二聚作用的關鍵胺基酸殘基，製造出互補配對的界面：
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在一條重鏈中，將側鏈較小的胺基酸替換為體積較大的胺基酸，形成凸起（Knob）。
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而在另一條重鏈中，以較小的胺基酸替換原本較大的殘基，形成凹槽（Hole）。
常見的突變組合為：
T366Y（在一條 CH3 結構域中形成 Knob）
Y407T（在另一條 CH3 結構域中形成 Hole）
這類突變促進重鏈間的互補性配對與異源二聚體形成，藉由物理構型的吻合提升結構穩定性。
然而，高純度生產 KIH 雙特異性蛋白質具有挑戰性，主因為其分子結構複雜，且兩條不同重鏈的表現量需達到接近一致。
因此，選擇穩定共表現的哺乳動物細胞株是生產的關鍵步驟，但此過程往往繁複且耗時。
AdipoGen Life Sciences 的靜默型 Fc-KIH 結構域設計
AdipoGen Life Sciences 透過 hIgG1-P329G LALA 突變 設計其靜默型 Fc-KIH 結構域，該設計完全阻斷 Fcγ 受體（FcγR）與補體蛋白 C1q 的結合，僅包含少量必要突變，同時不影響 FcRn 的結合能力與 Fc 區的穩定性。
LALA-PG 突變表現出：
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對 Fcγ 受體與 C1q 無可偵測的結合活性
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在功能性細胞實驗中 無活性反應
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且 不引發發炎性細胞激素反應
FIGURE: Fc (LALA-PG)-KIH (human) IgG1 Control (rec.) (Prod. No. AG-35B-0018) does not bind to the human Fcγ Receptor I.
LITERATURE: (1) Knobs-into-Holes (KIH) Technology: J.B. Ridgway, et al.; Protein Eng. 9, 617 (1996) • (2) Efficient Generation of Bispecific Murine Antibodies for Pre-Clinical Investigations in Syngeneic Rodent Models: A.F. Labrijn, et al.; Sci. Rep. 7, 2476 (2017) • (3) Novel human IgG1 and IgG4 Fc-engineered antibodies with completely abolished immune effector functions: T. Schlothauer, et al.; Prot. Eng. Design Sel. 29, 457 (2016)
Product Name
PID
Protein Construct
Fc-KIH Silenced
IgG 為基礎的效應功能
基於IgG的抗體與Fc融合蛋白是被廣泛應用於前臨床和治療用途的生物製劑。它們與免疫系統的交互是由Fcγ受體（FcγRs）這類膜結合蛋白所控制與介導。這些生物製劑由抗原結合位點組成，決定了其特異性與親和力，並包含可與Fc受體（FcγRI、FcγRII、FcγRIII）、補體C1q以及血液中的新生兒Fc受體（FcRn）結合的Fc片段，從而啟動免疫效應反應。Fc區所介導的效應功能可強烈影響其功能結果，這些效應包括抗體依賴的細胞介導細胞毒性（ADCC）、抗體依賴的細胞吞噬作用（ADCP）以及補體依賴的細胞毒性（CDC），這些功能皆是透過Fc區與不同細胞類型上的Fc受體互作而實現。
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ADCC（抗體依賴的細胞介導細胞毒性）：效應細胞上的Fc受體與目標細胞上的生物製劑的Fc區結合，導致溶解酶的釋放與誘導細胞死亡的分子表現，進而使目標細胞裂解。
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ADCP（抗體依賴的細胞吞噬作用）：吞噬細胞上的Fc受體與目標細胞或免疫複合物上的生物製劑的Fc區結合，促進透過吞噬作用的清除。
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CDC（補體依賴的細胞毒性）：C1q與目標細胞上的生物製劑的Fc區結合，啟動補體級聯反應並組裝膜攻擊複合體（MAC），導致細胞裂解。
半衰期：IgG/Fc區域（即IgGs）與新生兒Fc受體（FcRn）的結合能保護抗體與Fc融合蛋白免於降解，從而延長其在血清中的半衰期。在酸性條件下（pH 6.0-6.5），FcRn與IgGs結合；而在中性至微鹼性條件下（pH 7.0-7.5），則會解離。具體來說，內皮細胞會透過內吞作用形成囊泡，攝取IgGs並形成酸化的內體，IgGs會與FcRn結合形成IgGs-FcRn複合物。該複合物經由循環內體被運送至細胞表面，在pH 7.4等生理條件下解離，IgG再次釋放回血液循環中。透過這種受體介導的回收機制，FcRn有效保護IgGs免於溶酶體降解，從而延長其半衰期。
Knobs-into-Holes（KIH）Fc區域的特性與標準的Fc融合區域或IgG抗體相似。
FIGURE: Mechanisms of action of IgG1 Abs or Fc fusion proteins, composed of direct effects, and indirect effects, including antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC), antibody-dependent cellular phagocytosis (ADCP) and complement-dependent cytotoxicity (CDC).
LITERATURE: The Role of Fc Receptors on the Effectiveness of Therapeutic Monoclonal Antibodies: P. Gogesch, et al.; Int. J. Mol. Sci. 22, 8947 (2021)
高效單體型IL-2蛋白
IL-2 是一種關鍵的淋巴細胞生長因子，對於效應性T細胞（CD4與CD8）、調節性T細胞（Tregs）以及自然殺手細胞（NK細胞）的維持與擴增至關重要。IL-2 透過中等親和力受體（由IL-2Rβ與IL-2Rγ組成）以及高親和力受體（額外包含IL-2Rα，即CD25）進行訊號傳導。IL-2 在T細胞的活化與增殖中扮演關鍵角色，並常應用於腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）療法中，以促進T細胞的擴增。
IL-2 Superkine 已被證實能選擇性誘導T細胞（CD4/CD8）的增殖（不包括Treg），進而顯著擴增細胞毒性CD8 T細胞與NK細胞，並在體內展現出優於野生型人類IL-2（IL-2 WT）的抗腫瘤效果。與二聚體形式的IL-2 Superkine:Fc 相比，單體形式的 IL-2 Superkine（monomeric）:Fc-KIH 展現出更強的活性，且其效能相當於甚至優於黃金標準IL-2藥物 Aldesleukin。
FIGURE: IL-2 Superkine (monomeric):Fc-KIH (human) (rec.) (Prod. No. AG-40B-0222) activates the IL-2 receptor better than the dimeric IL-2 Superkine (Prod. No. AG-40B-0111) using the IL-2 Bioassay (Promega JA2201).
FIGURE: IL-2 Superkine (monomeric):Fc-KIH (human) (rec.) (Prod. No. AG-40B-0222) and IL-2 (human) (monomeric):Fc-KIH (human) (rec.) (Prod. No. AG-40B-0224) are equivalent or better than the Gold Standard IL-2 Aldesleukin to increase proliferation of CTLL-2 cytotoxic T cells.
Product Name
PID
Protein Construct
Fc-KIH Silenced
高活性異源二聚體 IL-27-KIH 蛋白
NEW
IL-27 是由兩個次單元組成：IL-27p28 和 EBI3。它能促進自然殺手細胞（NK 細胞）與 T 細胞的增生，並刺激干擾素-γ（IFN-γ）的產生。IL-27 對多種病毒具有強效抗病毒活性，並可透過誘導抗血管新生的趨化因子發揮抗腫瘤作用。IL-27（小鼠）：Fc-KIH（人源）（重組）是一種異源二聚體的 Fc-KIH 蛋白構 型，可與小鼠與人類的 IL-27 受體複合體結合，並在小鼠與人類細胞中活化 Stat3 磷酸化。與市售的傳統二聚體 IL-27（小鼠）：Fc 相比，其活性更強。
FIGURE: IL-27 (mouse):Fc-KIH (human) (rec.) (Prod. No. AG-40B-0236) (Heterodimer) is more active than an IL-27 (mouse):Fc from a competitor (Dimer of Heterodimer) in Stat3 phosphorylation in HepG2 cells (shown as quantification figure of the western blot).
FIGURE: IL-27 (mouse):Fc-KIH (human) (rec.) (Prod. No. AG-40B-0236) (Heterodimer) is more active than an IL-27 (mouse):Fc from a competitor (Dimer of Heterodimer) in Stat3 phosphorylation in HepG2 cells.
Product Name
PID
Protein Construct
Fc-KIH Silenced
獨特高活性同源二聚體 GDF15-KIH 蛋白
NEW
GDF15 的作用具多重效應，包括調節食慾、影響代謝、妊娠、生存訊號、免疫反應及發炎等功能。AdipoGen Life Sciences 所開發的同源二聚體蛋白 Fc (LALA-PG)-KIH（人源）：GDF15（小鼠）（重組） 是一種獨特蛋白，具備長效且高活性的特性，適用於體內研究。與傳統 GDF15-Fc 蛋白容易形成無活性的巨大聚合物不同，此蛋白能穩定形成具有生物活性的同源二聚體。
FIGURE: A binding assay shows that Fc (LALA-PG)-KIH (human):GDF15 (mouse) (rec.) (Prod. No. AG-40B-0245) binds with high affinity to its receptor GFRAL (mouse). The Fc (LALA-PG)-KIH (human):GDF15 (mouse) (rec.), which migrates as a dimer by SEC, binds to its receptor mouse GFRAL with an EC50 ~15 ng/ml, while the GDF15 (mouse):Fc (human) (rec.), that migrates as an aggregate by SEC (>1000 kDa), binds similar to the control protein with low affinity.
Product Name
PID
Protein Construct
Fc-KIH Silenced
InVivoKines™ − Product Overview
Product Name
PID
Protein Construct
Fc-KIH Silenced
AG-40B-0257
NEW
Heterodimer
NEW
LALA-PG
NEW
AG-40B-0259
NEW
Monomer
NEW
LALA-PG
NEW
InVivoKines™ - Selected Structures
